摘要: 目的 构建增强型绿色荧光蛋白 （ｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ?ＥＧＦＰ）标记的 Ｌ型电压门控钙通 道 （Ｌ－ｔｙｐｅｖｏｌｔａｇｅ－ｇａｔｅｄｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｓ?Ｌ－ＶＧＣＣｓ） α1Ｃ亚基羧基末端肽段 （ＣＴ?1587－2169）的真核表达载 体?并在 ＣＯＳ－7细胞中表达。方法 采用 ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增 ＣＴ的 ｃＤＮＡ?克隆至真核表达载体 ｐｃＤＮＡ3．1；采 用 ＰＣＲ方法扩增标签蛋白 ＥＧＦＰ的 ｃＤＮＡ?克隆至重组体 ｐｃＤＮＡ3．1－ＣＴ?ＥＧＦＰ位于 ＣＴ的羧基末端；采用脂质体 转染法将重组体 ｐｃＤＮＡ3．1－ＣＴ－ＥＧＦＰ转染 ＣＯＳ－7细胞?通过荧光显微镜和免疫印迹等方法检测重组体的表 达。结果 扩增了 ＣＴ和 ＥＧＦＰ的 ｃＤＮＡ；构建的 ｐｃＤＮＡ3．1－ＣＴ－ＥＧＦＰ真核表达载体经限制性内切酶酶切鉴定 及测序分析证实了其序列的正确性；荧光显微镜下转染重组质粒的 ＣＯＳ－7细胞中观察到绿色荧光?免疫印迹分 析显示 ｐｃＤＮＡ3．1－ＣＴ－ＥＧＦＰ转染组有明显条带。结论 成功构建 ｐｃＤＮＡ3．1－ＣＴ－ＥＧＦＰ真核表达载体?并且 在 ＣＯＳ－7细胞中得到表达