摘要: 目的 克隆肠道病毒71型( EV71 )BrCr株外壳蛋白1(VPI )基因,构建原核表达载体PE128/VPI,表达VPI重组蛋白,以VPI免疫产蛋母鸡,获得抗VPI的鸡免疫球蛋白(IgY)。方法 培养Vero细胞,利用Vero细胞增殖肠道病毒EV71 BrCr株,提取病毒总RNA,利用RT-PCR扩增出VPI目的基因,目的基因插入克隆载体PGEM-T,提取重组质粒,经BamH 1、EoR 1双酶切获得目的基因,插入原核表达载体pET-28 ,重组子同时BamH I,EcoR 1双切和测序鉴定,转化入感受态工程菌E. coli BL21 (DE3) ,获得阳性重组工程菌,经IPTG诱导获得表达融合蛋白,试剂盒纯化蛋白,经SDS-PACE和Western blotting鉴定后,用VPI蛋白免疫开产母鸡,收集鸡蛋,利用ECG stract" IgY Purification System试剂盒提取卵黄抗体gY,间接ELISA测滴度,SDS-PAGE和Westen blotting验证其表达量和免疫活性。结果 本实验成功扩增出肠道病毒EV71 BCr株VPI基因,获得了含重组表达质粒pET28//VPI的阳性工程菌株,经IYIC诱导能高效表达VP1蛋白,VPI经SDS-PAGE和Westem bloing鉴定后,利用纯化后VPI蛋白免疫产蛋母鸡,提取的lgY经ELISA鉴定后其滴度为1:10’,SDS-PAGE和Western bloting 证实为抗VPI的特异性1gr,结论 成功的从EV71 BrCr株护增出VPI滥因,构建了PET28a/VP1表达载体,获得高效表达融合蛋白,免疫产蛋母鸡后制备高效价抗VPI蛋白的特异性lgY