[1]代春潇,宋远见,张云山,等. 大鼠MKK7真核表达质粒的构建及其在COS7细胞中转染效率[J].徐州医科大学学报,2017,37(04):211-215.
  [J].Journal of Xuzhou Medical University,2017,37(04):211-215.
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 大鼠MKK7真核表达质粒的构建及其在COS7细胞中转染效率()
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《徐州医科大学学报》[ISSN:2096-3882/CN:32-1875/R]

卷:
37
期数:
2017年04期
页码:
211-215
栏目:
出版日期:
2017-04-25

文章信息/Info

Title:
      
作者:
代春潇1宋远见2张云山1赵小芳1 王玉兰1
1.徐州医科大学解剖学教研室,江苏徐州 221004;2.徐州医科大学遗传学教研室
关键词:
 真核表达质粒COS7转染效率脂质体
分类号:
Q343
文献标志码:
A
摘要:
 旨在探索大鼠丝裂原活化蛋白激酶激酶7(mitogen activated protein kinase kinase 7,MKK7)基因在体外细胞实验中的表达调控规律。方法 利用分子生物学方法将大鼠MKK7全长cDNA序列克隆到编码增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)和Flag(编码DYKDDDDK亲水性多肽)标签的真核表达载体Pvp16-AD中,构建出Pvp16-Flag-MKK7-eGFP 重组质粒。通过酶切及DNA测序的方法验证重组质粒序列的正确性后,采用脂质体介导方法将重组质粒瞬时转染COS7细胞,通过荧光显微镜观察DNA与脂质体在不同比例情况下以及在确定最高转染效率的比例后不同时间段大鼠MKK7基因表达情况。结果 成功构建重组真核表达质粒Pvp16-Flag-MKK7-eGFP。酶切及DNA测序方法确定重组质粒中大鼠MKK7序列与原序列一致。重组质粒与脂质体的比例为1:3时,重组质粒在COS7细胞中的表达量最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。质粒转染后72 h时,表达MKK7基因的细胞数量以及COS7细胞中MKK7蛋白表达量相对最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 大鼠MKK7重组真核表达载体的构建及其在COS7细胞中转染效率的探索工作为研究大鼠MKK7基因在体外引起细胞分化、增殖、凋亡、炎症反应和应激反应等一系列生物学改变奠定基础。

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备注/Memo

备注/Memo:
基金项目:国家自然科学基金面上项目(81371300);江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(KYLX15_1472);江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(KYLX15_1473)
*通信作者,E-mail: ylwang-xz@163.com
更新日期/Last Update: 2017-05-30