抗人卵巢癌单链抗体基因的构建
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摘要: 目的构建抗人卵巢癌单抗COC183-B2单链抗体(scFv)基因。方法将通过PCR方法体外扩增并经测序验证的重链、轻链可变区(VH、VL)基因先后重组入原核表达质粒pTHA90相应的位点上,中间通过一连接肽(Gly4Ser)3基因连接构建成单链抗体基因(scFv),连接产物转化相应受体菌TOP10,提取质粒,酶切鉴定重组克隆。表达产物经ELISA方法测定活性。结果重组克隆经酶切鉴定可见预期大小的片段,表明重组成功。表达产物经ELISA检测证实具有与卵巢癌抗原结合的能力。结论本研究成功地构建了scFv基因,且其表达产物保留了抗体的亲和性和特异性