摘要: 目的 制备抗磷酸酪氨酸多克隆抗体,利用此抗体研究缺血再灌注对海马磷酸酪氨酸蛋白(p-tyrpr)免疫反应性的影响。方法 以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白(BSA)作为免疫原免疫兔获得抗血清。将磷酸酪氨酸偶联到溴化氰活化的sepharose 4B上。抗血清经磷酸酪氨酸-sepharose 4B亲和柱纯化,所得抗体专一性强,并经dot blot鉴定。结果 抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白、溶菌酶、卵清蛋白起抗原抗体反应,而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶、卵清蛋白;不识别作为免疫原的骨架成分BSA,也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白;缺血/再灌注6h海马各区p-ty-pr免疫反应性明显增强,氯胺酮或硝苯吡啶对此有拮抗作用。结论 亲和纯化后的抗体是高度特异性的。缺血/再灌注后p-tyr- pr免疫反应性增强与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体以及电压门控的钙离子通道有关。