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    人白细胞介素-10cDNA的克隆

    • 摘要: 目的 克隆人白细胞介素 10 (hIL - 10 )cDNA的全长序列 ,为其分子生物学利用奠定基础。方法 无菌条件抽取正常成人外周血 15ml,分离单核细胞 ,用刀豆素A(ConA)刺激培养 2 4h ;离心得到一定量细胞 ,加入变性液 ,一步法提取细胞总RNA ;反转录合成IL - 10的第 1条链 ,用自己设计的特异性上下游引物进行PCR扩增 ,得到期望分子量的PCR产物 ;酶切后插入PcDNA3载体 ,转染感受态细胞进行筛选制备 ,并行酶切鉴定和测序。结果 外周血单核细胞经ConA刺激后IL - 10转录水平增加 ,从提取的RNA反转录产物中容易扩增出期望分子量的PCR产物 ,酶切鉴定证明得到的IL - 10cDNA分子量与基因库报告的相近 ,测序结果表明得到的IL - 10cDNA序列与基因库报告的序列完全一致。结论 人的IL - 10cDNA全长序列被成功克隆。

       

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