抗HIF-iamRNA锤头状核酶设计及其基因克隆
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摘要: 目的 设计一个抗缺氧诱导因子 1α(HIF - 1α)mRNA的锤头状核酶 ,并构建它的基因表达载体 ,以便用于肿瘤的基因治疗。方法 用RNA结构分析软件预测HIF - 1αmRNA的二级结构并选择合适的核酶作用靶点 ,以选定的靶点设计相应的锤头状核酶 ,合成编码核酶的DNA并克隆到载体pSP72上 ,酶切及DNA测序鉴定核酶序列。结果 HIF - 1αmRNA的 72位含有GUC三联体 ,可以作为核酶的切割靶点 ,设计的核酶包括 2 2nt的催化活性中心和 16nt的侧翼序列。计算机辅助预测证明此位点为合适的靶点 ,限制性内切酶和DNA测序证实核酶基因正确插入载体pSP72上。结论 成功设计并构建抗HIF - 1αmRNA锤头状核酶基因表达载体 ,为进一步运用核酶切割HIF - 1αmRNA基因 ,从而抑制肿瘤生长提供了必要条件。