摘要: 目的 包装及鉴定低氧反应元件(HRE)启动子控制下缺氧诱导目的基因 hVEGF165基因表达的 2型重 组腺相关病毒。 方法 磷酸钙三质粒共转染方法将 pAAV -HRE9 -VEGF165 、pAAV -Rep /cap、pHe lper质粒转染 H EK293T细胞, 制备 2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2)。 分离培养 S -D大鼠心肌细胞, 转染 rAAV, 细胞固定后 做免疫细胞荧光染色, 检测细胞内血管内皮细胞生长因子 (VEGF165)蛋白的表达。 结果 pAAV -H RE9 - VEGF165质粒经测序鉴定, 结果与 NCBI GenBank公布的人 VEGF165 cDNA 核苷酸序列 (AB021221)完全一致, 含 H RE 启动子及目的基因 hVEGF165的 2型重组非复制型腺相关病毒包装成功, 可感染原代培养的大鼠心肌细胞, 缺氧可诱导 VEGF165蛋白表达。 结论 成功包装并鉴定了 rAAV– HRE9 - hVEGF165载体, 可有效转染心肌细胞, VEGF165基因的适时表达, 为缺血性心肌疾病的“分子搭桥”治疗提供了更可能的安全性