人 ＯＡＺ突变基因的克隆构建及重组蛋白表达
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摘要: 目的 构建人鸟氨酸脱羧酶抗酶 (ＯＡＺ)突变基因,重组至原核表达载体中并表达出重组蛋白。方法 采用基因定点突变技术在 ＯＡＺ基因 ＴＣＣＴＧＡＴＧ(199～206)位置造成第 202位碱基 Ｔ碱基缺失,使核糖体的阅读 框 +1移位,连续表达 ＯＡＺ基因的 ＯＲＦ2部分。测序鉴定后,重组质粒转化 ＢＬ21菌,进行 突 变 基 因 的 蛋 白 表 达。 结果 重组质粒经测序后确认 202位碱基 Ｔ缺失,其余碱基序列无变 化。重 组 的 突 变 基 因 转 入 ＢＬ21后 在 ＩＰＴＧ 诱导下表达 ＯＡＺ全长蛋白,ＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析在相对分子质量 45900左 右 出 现 新 的 蛋 白 条 带。结 论 成 功 构 建 人 ＯＡＺ突变基因重组质粒,转化 ＢＬ21后表达出融合的 ＯＡＺ全长蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础
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