摘要: 目的 构建突变型 ＰＳＤ-95的 重 组 表 达 质 粒 (Ｙ432Ｆ、Ｙ439Ｆ、Ｙ523Ｆ和 Ｙ533Ｆ,酪 氨 酸 突 变 为 苯 丙 氨 酸 ),并在 ＣＯＳ-7细胞中表达。方法 以野生型 ＰＳＤ-95-ｐｃＤＮＡ3.1为模板,采用重叠延伸 ＰＣＲ法获得突变型 ＰＳＤ-95的局部或全长 ｃＤＮＡ片段,并克隆至 ＰＳＤ-95-ｐｃＤＮＡ3.1或 ｐｃＤＮＡ3.1载体；以脂质体法将构建好的重 组质粒转染 ＣＯＳ-7细胞；通过免疫印迹法鉴定 ＰＳＤ-95及其突变体 的 表 达。结 果 限 制 性 内 切 酶 酶 切 和 测 序 结果表明,扩增出的突变型 ＰＳＤ-95基因完全正确。免疫印迹显示,转染的突变型重组质粒在相对分子质量 9.5 ×104 处均有相应条带出现。结论 成功构建了 4个 ＰＳＤ-95酪 氨 酸 残 基 突 变 体 的 真 核 表 达 质 粒,重 组 质 粒 在 ＣＯＳ-7细胞中高效表达