摘要: 目的 构 建 海 人 藻 酸 受 体 亚 基 ＧｌｕＲ6的 真 核 细 胞 表 达 载 体,并 在 ＣＯＳ-7细 胞 中 表 达。方 法 根 据 ＧｅｎＢａｎｋ数据库中 ＧｌｕＲ6的 ｃＤＮＡ序列 (Ｚ11548),分 3段分 别 设 计 并 合 成 3对 引 物。从 大 鼠 海 马 组 织 中 提 取 总 ＲＮＡ,采用 ＲＴ-ＰＣＲ方法获得目的基因片段,分别 克 隆 至 ｐＧＥＭ -Ｔ载 体 中。经 测 序 确 证 后,将 该 3段 ｃＤＮＡ片 段依次与 ｐｃＤＮＡ3.1(+)载体定向连接。将鉴定正确的重组体以脂质体法转染至 ＣＯＳ-7细胞中,免疫印迹法检 测 ＧｌｕＲ6蛋白质表达水平。结果 克隆了 ＧｌｕＲ6的 ｃＤＮＡ,并构建了其真核表达载体 ＧｌｕＲ6-ｐｃＤＮＡ3.1,经限制 性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性；免疫印迹分析显示,ＧｌｕＲ6在 ＣＯＳ-7细胞中表达 水 平 较 高。结论 成功构建 ＧｌｕＲ6-ｐｃＤＮＡ3.1真核表达载体,并且在 ＣＯＳ-7细胞中得到高效表达