摘要: 目的 探讨提高人端粒酶逆转录酶基因 (ｈＴＥＲＴ)转染原代培养乳鼠心肌细胞效率的有效 方 法。方 法 通过测量悬浮心肌细胞的半径,估计电击穿时临界电压的范围。以钙黄素为报告分子,确定最佳可逆性电击穿时 电压范围。进而用 ｐＡｄｔｒａｃｋ-ＧＦＰ-ｈＴＥＲＴ对乳鼠心肌细胞进行转染,并通过绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)的表达比较电 穿孔、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ2000和 ＴｏｐＥａｓｙ3种转染方法对 ｈＴＥＲＴ的转染效率。结果 电压 170～200Ｖ,波宽 2ｍｓ左 右,间隔 125ｍｓ,脉冲 4～6个时,ｐＡｄＴｒａｃｋ-ＧＦＰ-ｈＴＥＲＴ可有效转染乳鼠心肌细胞,转染率高达 7.5%,而 Ｌｉｐｏ- ｆｅｃｔａｍｉｎｅ2000法和 ＴｏｐＥａｓｙ法转染率均为 0 (Ｐ <0.01)。结论 利用电穿孔技术可将 ｈＴＥＲＴ长 ｃＤＮＡ片段导 入原代培养的乳鼠心肌细胞