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    L型电压门控钙通道 α1C亚基羧基末端肽段 真核表达载体的构建和表达

    • 摘要: 目的 构建增强型绿色荧光蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein?EGFP)标记的 L型电压门控钙通 道 (L-typevoltage-gatedcalciumchannels?L-VGCCs) α1C亚基羧基末端肽段 (CT?1587-2169)的真核表达载 体?并在 COS-7细胞中表达。方法 采用 RT-PCR方法扩增 CT的 cDNA?克隆至真核表达载体 pcDNA3.1;采 用 PCR方法扩增标签蛋白 EGFP的 cDNA?克隆至重组体 pcDNA3.1-CT?EGFP位于 CT的羧基末端;采用脂质体 转染法将重组体 pcDNA3.1-CT-EGFP转染 COS-7细胞?通过荧光显微镜和免疫印迹等方法检测重组体的表 达。结果 扩增了 CT和 EGFP的 cDNA;构建的 pcDNA3.1-CT-EGFP真核表达载体经限制性内切酶酶切鉴定 及测序分析证实了其序列的正确性;荧光显微镜下转染重组质粒的 COS-7细胞中观察到绿色荧光?免疫印迹分 析显示 pcDNA3.1-CT-EGFP转染组有明显条带。结论 成功构建 pcDNA3.1-CT-EGFP真核表达载体?并且 在 COS-7细胞中得到表达

       

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