摘要: 目的依据Tet-on系统的原理，构建2个真核表达载体pTRE-Cre-ECFP(PI)和Pcmv-rtTA-EG-FP-Cre-Phemv(P2)并转染293T细胞，通过观察报告基因EGFP表达的绿色荧光，检验载体中基因元件能否正常发挥作用。方法从pCre一IRES-EGFP载体上切下Cre-EGFP,与pTRE载体连接成PI载体，切下PI的部分片段Phcmv-Cre-EGFP与pTet-On载体的部分片段Pcmv-rtTA连接成P2截体，利用脂质体将pTet-on和P1共转染、将P2单转染入293T细胞，加入或者不加强力霉紫(Doxcycline,Dox)诱导，观察绿色荧光。结果成功构建载体P1及P2；P1和pTet-on质粒的共转染及P2的单转染在Dox诱导下均有绿色荧光的表达，无Dox诱导时绿色荧光表达水平极低。结论构建的载体P1及2中的基因元件在体外均能正常发挥作用，为进一步制备诱导性表达Cre的转基因小鼠奠定了基础。