摘要: 目的克隆人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,.hHGF)的编码基因，构建真核表达载体，获得hHGF蛋白。方法从含hHGF的人肝脏组织总RNA中，利用RT-PCR方法扩增出hHGF cDNA;利用TA克隆技术，将该基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1+质粒，转化E.coli DH5a细胞，鉴定pcDNA.3.1+~hH-GF重组质粒。将重组质粒pcDNA3.1+-hHGF转染293T细胞，应用ELISA方法检测hHGF在293T细胞中的表达。结果①测序结果证实本实验克隆的基因与人HGF基因序列一致。②重组质粒pcDNA3.I+-HGF是具有表达功能的真核表达质粒。③pcDNA3.1+-hHGF转染293T细胞，于转染后12、24、48、72h均能检测到hH-GF表达。结论成功构建hHGF真核表达载体，获得分泌性hHGF蛋白。