摘要: 目的构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。方法通过重叠延伸PCR、常规PCR方法，分别获得G250重链的可变区和恒定区(GH)cDNA序列及G250轻链(CL)cDNA序列，并克隆至pCL.ONI2-IRES载体上，构建质粒pCLONI2-GL-IRES-GH。酶切质粒PCLONI2-GL-IRES-GH回收GL-IRES-GH片段，克隆至腺病毒载体pDC315,构建pDC315-GL-IRES-CH(pDC315-G250)。将pDC315-G250与腺病包装骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞，重组包装表达C250抗体的增殖缺陷型腺病AdDC315-C250。纯化病毒表达的G250抗体，免疫印迹实验检测该抗体能否与细胞表面抗原特异性结合。结采PCR及测序结果表明成功构建质粒pCLONI:2-GL-IRES-GH及腺病毒穿梭质粒pDC315-G250。PCR鉴定表明重组腺病毒AdDC315-G250含有目的基因，病步包装成功。免疫印迹实验结果显示，纯化的抗体在G250抗原阳性的细胞中能检测到目的条带。结论成功构建表达抗C250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。