摘要: 目的 为研究小干扰RNA(siRNA)在移植免疫、肿瘤防治等方面的应用,构建针对大鼠T细胞4-1BB基因编码区的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。方法 根据RNA干扰(RNAi)作用原理,设计、合成4条T细胞4-1BB基因的shRNA (shRNA441 shRNA540,shRNA621 ,shRNA758 ) DNA片段,插入质粒pCPU6,构建4个编码目的shRNA的表达质粒(p441 p540 ,p621 ,p758) ,酶切及测序鉴定。设对照组,利用电穿孔法在体外将目的基因片段导入BN大鼠T细胞,48 h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)检测其对T细胞41BB基因表达的抑制作用,并筛选、确定最佳效朵的干扰质粒。结果 酶切及测序证实成功构建重组干扰质粒p441 p540,p621和p758,转染T细胞后,4-1BB相对表达量分别为(33.4±2.3)%、(53.0±2.3)%、(62.13.1)%、(40.9±1.5)% ,对照组4-1BB相对表达址为(67.2±1.5)%。其中p441沉默效果最佳(P<0.01)结论siRNA具有抑制活化T细胞4-1BB基因表达的作用,干涉靶点具有选择性。