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    大鼠PEDF 44mer慢病毒载体的构建及鉴定

    • 摘要: 目的构建大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)44mer基因的慢病毒表达载体并检测其表达。方法化学合成PEDF44mer-6his,亚克隆入GV206载体,测序鉴定。挑取阳性克隆转染293T细胞,实时荧光定量PCR法测定病毒滴度。将已构建的病毒转染293T细胞,RT-PCR和Western blot法检测44mer-6his表达。结果阳性克隆测序与设计的44mer基因序列完全一致,44mer慢病毒构建成功。实时荧光定量PCR法检测病毒滴度为2.00E+9TU/ml。44mer慢病毒转染293T细胞后,RT-PCR检测到44mer表达。Vestern blot显示44rmer-6his融合蛋白表达阳性。结论成功设计构建了PEDF44mer慢病毒,为进一步研究44mer在缺血性心肌病中的作用和机制奠定基础。

       

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