摘要: 目的 构建人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体,用于其活性调节机制的研究。方法 以野生型pCDNA3.1 -SIRT6 -FLAG真核表达重组体为模板,用定点突变PCR的方法获得SIRT6的酪氨酸突变体;突变产物转化大肠杆菌DH5a进行筛选、序列测定;野生型和突变型重组体转到293H细胞, Western blot鉴定SIRT6的表达。结果 ①经PCR法得到了SIRT6的突变重组体;②SIRT6突变重组体测序图谱与预期结果完全一致;③Western blot检测野生和突变型 SIRT6蛋白能表达。结论 获得了能真核表达硝基化位点的突变型SIRT6蛋白的重组体。