华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析

摘要: 目的克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白( Clonorchis sinensifatty acid binding protein, CSFABP),并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CSFABP的已知基因序列设计合成一对引物,应用RT-PCR技术扩增编码CSFABP的基因片段。将扩增的CSFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a( +)中,转化入大肠埃希菌(E. coli) DH5a中,经含卡那霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化人E. coli BL21中,经异丙基-B-D-硫代半乳粧苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认,成功构建重组质粒pET30a( +)-CSFABP,并在E. coli B121中高效表达。Western blot试验证实表达的CsFARP能该特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a( +)-CSFABP,获得的CSFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。