摘要: 目的 采用非特异性转录因子介导的谱系重编程系统,将小鼠心脏成纤维细胞( cardiac fibroblasts,CFs)直接转分化为心脏祖细胞(cardiac progenitor cells, CPCs)。方法 取昆明小鼠乳鼠心肌组织,差速贴壁法分离CFs,免疫荧光染色、流式细胞术分别检测CFs性状及纯度,以携带含小鼠tet-on系统的4种重编程因子0ct4 ,Sox2,KI4,c-myc( OSKC)慢病毒等比例感染第3代(P3) CFs, A组:感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒,重编程培养基中不加入白血病抑制因子( LIF),加入JAK inhabit 1 (J11),以抑制向iPSCs方向的转分化。B组:对照组感染空载体病毒。C组:感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒,重编程培养基中加入LIF,不加入J11,不抑制向iPSCs方向的转分化。在特定时间点为感染的细胞更换不同培养条件,观察细胞形态及生物特性的变化:0实时荧光定量PCR ( Real time-PCR)法检测重编程各个时间点CPCs特异性转录因子Mespl、Nkx2.5Isll,CATA4及胚胎干细胞多能性因子0ct4 ,Sox2,c-myc,KI4,Naong的表达;@CPCs特异性标记Nkx2.5,Isll免疫荧光染色鉴定:3CPCs自分化为搏动心肌细胞的检测;@心肌细胞特异性标记cTnl免疫荧光染色鉴定CPCs向心肌细胞方向的分化潜能。结果 形态学观察,病毒感染11-14天,可见部分CFs形态发生改变,形成CPCs样克隆;@CPCs克隆Nkx2.5、sl1免疫荧光染色阳性;3CPCs可自分化为搏动的细胞团,其中的细胞cTnl免疫荧光染色阳性;@Real-time RCR检测结果显示,重编程第4天,CPCs早期特异性转录因子Mespl即开始表达,而iPSCs多能性因子Naong在重编程第9天才开始表达。结论 心脏成纤维细胞可以直接转分化为CPCs.