摘要: 目的 探讨Kifl8A的SUMO化修饰及其调控机制。方法 在HEK293T细胞中共转染Flag-Kifl8AHA-SUMO1或His-SUMO1质粒,免疫沉淀富集Flag-Kif18A,免疫印迹检测HA-SUMO;用TALON树脂富集His-SUMO1蛋白,免疫印迹检测Flag-Kif18A考察Kifl8A的SUMO化水平。利用SUMOsp 2.0软件预测Kifl8A可能发生SUMO化的潜在位点,将Flag-Kifl8A质粒中的相应位点上的编码序列由Lys突变成Arg,在HEK293T细胞中表达突变体后再检测Kifl8A的SUMO化水平的变化来确定Kif18A的SUMO化位点。通过在HEK293T细胞中共染转Flag-Kif18A,HA-SUMO1以及SENPI野生型(WT)或SENPI酶活位点突变型(Mut)质泣,再采用免疫沉淀和免疫印迹检测Kifl8A的SUMO化水平,来证明SENPI是Kif18A的去SUMO化蛋白酶。最后,用Nocodazole处理HeLa细胞,使其同步化在G,/M阶段,再考察G,/M期HeLa细胞中Kifl8A的SUMO化水平。结果 Kif18A能被SUMO1或者SUMO2修饰,K47和K148是Kif18A发生SUMO化的两个主要位点,SENPI催化Kifl8A的去SUMO化修饰。HeLa细胞同步化在G,/M期后, Kif18A的SUMO化水平显著下降。结论Kifl8A能发生SUMO化修饰,且其SUMO化受到细胞有丝分裂进程的调控。