摘要: 目的 监测克隆性基因重排各检测管中PCR反应体系的完整性及反应条件的稳定性,避免基因重排的假阴性结果。方法 利用多重PCR方法,检测免疫球蛋白(Ig)中IgH-FRI、IgH-FR2,IgH-FR3 、Igk-vJ. gK-V/i克隆性基因重排和T细胞受体(TCR)中TCRB-VJITCRB-VJ2 ,TCRB-DJ、TCRY-VJI和TCRyVJ2克隆性基因重排。0选择GC100和GC300作为管内对照,在各反应管中加入适当的内对照引物,浓度分别为0. 625 umol/L,1.25 umol/L,2.5 umol/L,5 umol/L和 10 umol/L, PCR扩增后行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE). 分析结果。②根据①的实验结果,在各反应管中加入最适浓度内对照,以制备好的突变浓度为20% 、10%7.5%,5%、2.5%的基因重排样本为模板, PCR扩增后行PAGE,分析结果。结果 克隆性重排检测引物工作液浓度均为10 umol/L;检测IgH-FRI 、IgH-FR2、gK-VJ、IgK-V/i、TCRB-VJI,TCRB-VJ2,TCRB-DJ和TCRy-VJ1各管中,加入管内对照基因的扩增片段大小均为100 bp,引物浓度均为5 umol/L;检测IgH-FR3管中,管内对照基因的扩增片段大小为300 bp,引物浓度为5 umol/L;检测TCRy-VJ2管中,管内对照基因的扩增片段大小为300 bp,引物浓度为1.25 umol/L,改进后体系检测敏感度在2.5%-5.0%之间。结论在BIOMED-2系统中增加合适的管内对照,能够监测每个检测管中PCR反应体系的完整性及反应条件的稳定性。